点击这里联系客服创伟生物
创伟生物
LGK-201
成功添加到购物车

目前选购商品共0件合计:0.00

添加到购物车
正在添加到购物车……
你已经收藏过该商品
成功加入收藏

收藏成功!

您已收藏了1个商品, 查看我的收藏>>

加标签(最多可选3个)

    • 添加
    确定 取消 最多可选不超过三个标签 请至少选择1个标签 设置成功 请输入自定义标签名称! 标签由数字、字母、汉字组成 存在该标签的收藏商品,无法删除 请选择要删除的收藏标签
    • 分享:

    • 收藏此商品
    Ligation high Ver.2
    商家编码:
    市 场 价:750.00
    售      价:750.00 - 2450.00 请登录,确认是否享受优惠
    销量:1 评价:0
    支:
    数量:
    - 库存:1
    • 立即购买
    • 加入购物车
    客服:
    点击这里联系客服创伟生物 创伟生物

    厂家:
    服务支持:

    组合购

    组合价: ¥
    原价: ¥
    选择组合购商品规格

    本试剂是在原产品『Ligation high』基础上改良的使用更方便的高效率单管型连接试剂。本试剂如右图所示,即便是-20℃条件下保存也不会冻结。从冷冻柜中取出后可立即使用。使用方法与原产品一样,只需在DNA样品中加入1/2〜等量的本品混合即可,非常简便。可广泛地用于突出末端、平滑末端、及TA克隆等用途。

    LGKh201d01090702

     

     特征
     

    特征1. 高效率
    TA克隆效率得到了大幅度的提高。
    在一般情况下,通过30分钟以内的反应即可获得足够的阳性克隆*。(参照实验例1)
    *标准的实验步骤反应时间设定为30分钟。

    特征2. 即便在-20℃保存也不会冻结
    从冷冻柜中取出后可立即使用。

    特征3. 简便的单管型
    使用方法与原有产品一样,只要将试剂和DN****段混合即可,非常简便。

     
     实验例
     

    实验例1. TA克隆效率的比较

    将T载体<50ng>与λDNA的0.5kb PCR扩增片段(用Taq DNA polymerase扩增后纯化)按1:3的摩尔比混合,16℃条件下进行30分钟的连接反应,用Competent cell DH5α转化后培养,第二天点白斑(确认插入)和蓝斑数。下图是以用Ligation high Ver.2出现的克隆数为100换算的比较图。结果可知,用Ligation high Ver.2可进行高效率的TA克隆。 LGKh201d02090702

    实验例2. DNA末端形状与连接效率的关系

    在16℃条件下反应时,将DN****段(0.5kb)的克隆效率与末端形状进行比较。结果可见,突出末端的连接约5分钟即可完成,而平滑末端及TA克隆30分钟约完成70〜80%。另外,平滑末端克隆及TA克隆时间超过1小时,到2小时为止,连接效率会逐渐提高。因此当克隆效率比较低时,可将反应时间提高至2小时左右可提高连接效率。

    LGKh201d03090702

     ※各反应以60分钟后白斑数为100作为标准。

     

    实验例3.使用未经纯化的PCR产物的TA克隆

    将T载体(50ng, 25fmol)和具有良好扩增效率的未纯化PCR产物(用Taq DNA polymerase扩增的0.5kb片段)按照各种比例混合,在该DNA溶液〈7.5μl〉中添加Ligation high Ver.2〈7.5μl〉,在16℃条件下反应30分钟。然后,用10μl反应液对E. coli DH5α感受态细胞〈100μl〉进行转化,用LB/Amp(X-Gal)培养基培养后点克隆数。结果可见,尽量少带入PCR反应液可得到良好的结果。 由于用纯化后的DNA片段可得到高效率,因此当效率低下时,可使用纯化后的PCR产物。 LGKh201d04090702
     
     
     相关信息
     

    <反应条件>
    各种用途的反应条件等,请参照
    产品说明书


    <注意>
    1.在−30℃以下长期保存,或在冷冻柜的冷气出风口处保存时,可能会产生冻结现象。经实验证明,5次反复冻融不会影响试剂活性,但注意请尽量不要使其冻结。产生冻结时,可用手指捏着离心管使其融解,但注意不要使其升温。
    2.产生白色沉淀时也可按照上述方法将沉淀溶解后正常使用。
    3.担心有可能产生冻结时,可事先将试剂分装成若干管保存。


    <几点建议>
    ●反应时间
    一般推荐16℃、30分钟,但普通的突出末端连接通常只需5分钟即可完成。当平滑末端或TA克隆的反应效率低下时,将反应时间延长至2小时左右通常可提高连接效率。

    ●反应液带入
    盐的带入会影响到连接反应。在TA克隆时,未经纯化的PCR产物的带入为0.5〜1μl(15μl反应体系)时,可获得很高的连接效率。使用
    MagExtractor -PCR & Gel Clean up进行纯化,TA克隆可获得更高的效率。

    ●TA克隆效率
    如想获得更高的连接效率,可使用磷酸化的引物进行PCR。关于引物的磷酸化,请参照
    这里

     
     参考文献
     

    1)Richard L. Hawkins et al.,Current Microbiol.,38:335−341(1999)

     
     价格表
     

    <点击品名即可下载产品说明书>

     品名

     包装*

     保存

    Code No.

    价格

      高效率连接试剂
    Ligation high Ver.2
     750μl×1支  -20℃  LGK-201  RMB 750

    *每次使用量为3.75μl时,可使用200次。TA克隆时Ligation high Ver.2为7.5μl。 

     
     相关产品价格表
     

    <点击品名可阅览详细信息>

    品名及内容

     包装

     保存

     Code No.

     价格

    高效率DN****段抽提试剂盒
    MagExtractor  -PCR& Gel Clean up-

    200次

    室温

    NPK-601

    RMB     1,200    

     
     相关记载&FAQ
     

    【FAQ】
    Ligation high Ver.2

    【相关产品记事】
    高效率平滑末端连接反应试剂盒:「Blunting high」

    【基因重组・克隆相关记事】
    扩增产物末端形状与TA克隆
    平滑末端克隆
    点突变导入
    用iPCR法进行引物设计的要领