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FSQ-101
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    ReverTra Ace qPCR RT Kit,逆转录试剂盒(配套qPCR用)
    商家编码:
    市 场 价:1500.00
    售      价:900.00 请登录,确认是否享受优惠
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    • 应用: qPCR专用RT试剂盒



    最适用于合成Realtime PCR用cDNA的逆转录试剂盒。


    本试剂盒是最适用于Realtime PCR用cDNA制作的逆转录反应试剂盒。由于采用了本公司
    高性能逆转录酶『
    ReverTra Ace』,反应效率非常出色。另外,通过改良,使得带入到
    Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小,即使在PCR反应体系中添加
    了多至20%体积的逆转录反应液,也能表现出良好的反应曲线,因此,最适合用于表达量
    较少的mRNA的高灵敏度测试。由于精简了试剂盒的构成,可非常简便地进行操作,仅需
    约15分钟的逆转录反应,即可得到充分的cDNA。

     

    FSQh101d01090520

           

    【相关产品】Realtime PCR试剂的详细信息请点击此处

     特征

    特征1. 超群的cDNA合成效率
    由于使用了最恰当比例的mix primer(oligo dT和Random primer)、以及经改良的反应缓冲液,可实现高效率的逆转录反应。
     
    特征2. 反应时间仅需15分钟
    逆转录反应仅需15分钟即可完成。此外,即便是要除去对Realtime PCR反应有阻碍的残留的模板RNA,也无须追加RNase H处理

    特征3. 提高了和Realtime PCR试剂的适应性
    通过改良,使带入到Realtime PCR反应体系的逆转录反应液的影响降到最小。即使在PCR反应体系中添加了多至20% (V/V)的逆转录反应液,也能表现出良好的反应曲线。因此,最适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测

     实验例

    追加了最新实验例,点击标题即可查阅详细信息。

    最新实验例
    mark_New.jpg实验例追加1 低表达量基因的检测比较例
    mark_New.jpg实验例追加2    微表达量基因的检测比较例

     实验例1 与用其他公司产品cDNA合成量的比较

    FSQh101d02090521.jpg

    以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板,根据各公司试剂盒推荐的条件进行逆转录反应。然后,在Realtime PCR反应液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分别添加上述的逆转录反应液各1% (V/V),用Realtime PCR对β-Actin和Polymerase ε的cDNA量进行定量。结果可见,在使用本试剂盒的情况下,两个目的片段都有最高的收量。 

     实验例2 RNase H处理与否对检测灵敏度影响的比较


    FSQh101d03090521.jpg
    以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板,使用ReverTra Ace qPCR RT Kit(蓝线)及另外添附RNase H的B公司cDNA合成试剂盒,按各自推荐的实验步骤进行逆转录反应(B公司试剂盒分别按RNase H处理(红线)/未处理(橙线)两种方法进行)。然后,按和实验例1同样的方法检测β-Actin的扩增效果。结果显示,用B公司的试剂盒RNase H未处理(橙线)的情况下,检测效果大幅下降。而用ReverTra Ace qPCR RT Kit(蓝线)进行反应,即便不追加RNase H处理也能显示出很高的扩增效率。已经过实验证明,用本试剂盒的情况下,RNase H处理与否灵敏度相等。
    ※本试剂盒不包含RNase H处理步骤。


     实验例3 模板RNA量的添加量对合成效率影响的探讨

    FSQh101d04090521.jpg
    在ReverTra Ace qPCR RT Kit的反应体系(10μl)中,分别添加HeLa细胞由来的total RNA 0.5μg - 0.5pg,分别进行逆转录反应。然后,采用和实验例2同样的方法扩增β-Actin基因。结果可见,在探讨的范围内,模板RNA的量和cDNA的收量密切相关,但无论模板RNA量的多寡,仍可维持很高的cDNA合成效率。由此可见,在目的片段浓度有差异的样品之间,逆转录反应效率的变化并不大,因此可将定量结果的误差控制在最小范围内。

     简要备注

    Q1. 虽然反应时间仅需15分钟,但如果延长反应时间,是否可提高cDNA的合成量?
    A1. 要对tRNA等高表达量的RNA进行完全逆转录时,延长反应时间可提高合成量,但一般情况下按照标准的推荐条件37℃15分钟即可。

    Q2. 可使用哪些模板RNA?  
     
    A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。

    Q.3 需要进行RNase H处理吗?  
     A3. 由于残留的模板RNA会阻碍PCR反应,所以一般情况下逆转录反应结束后都要通过RNase H分解模板RNA。但本试剂盒运用本公司开发的新系统,在逆转录反应后可用非酶性方法除去模板RNA。因此,逆转录反应后无需RNase H处理。


    其他产品FAQ请点击
    此处

     参考文献

    1)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226(2003)
    2)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66(2002)
    3)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246(2002)
    4)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460(2001)
    5)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675(2000)
    6)S.Lee et al.,Gene,245:253−266(2000)

     价格表

    (点击品名即可下载说明书)

     品名及内容  包装 保存
    温度

     Code No.

     价格

    ReverTra Ace qPCR RT Kit
     ・5×RT Buffer
     ・Enzyme Mix
     ・Primer Mix
      (oligo dT+Random primer)
     ・Nuclease-free Water

    40次份*

    -20℃ FSQ-101S

    RMB 300

    200次份*×1
    -20℃ FSQ-101

    RMB 1,500

    200次份*×2
    -20℃ FSQ-101B

    RMB 2,760

    200次份*×4
    -20℃ FSQ-101C

    RMB 5,000

    *反应体系为10μl时的反应次数。

     相关产品价格表

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     品名及内容  包装 保存
    温度
    Code No.  价格
    THUNDERBIRD SYBR(Probe)qPCR  Mix 

    1ml×5支

    -20℃

    QPS-201

    1,500

     

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