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    RIPA Lysis buffer (弱)
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    对于培养细胞样品:

    使用前先融解RIPA裂解液。 根据样品量取取适当量的裂解液,4°C放置,

    在使用前几分钟加入蛋白酶抑制剂,如加入PMSF,使PMSF的终浓度为1mM。

    2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用预冷PBS洗一遍,刮下细胞,  3000g离心5分钟收集细胞

    (也可以直接在培养皿或培养板中加入裂解液),加入适量裂解液,按100万个细胞中

    加入 100μL裂解液计算,如6孔板加入200-400ul裂解液 ,用移液器吹打数下,使得裂解液

    和细胞充分接触;置于冰上孵育30分钟,14000g离心10分钟,取上清即为蛋白提取产物。


    3、对于悬浮细胞,先3000g 离心5分钟收集细胞,用预冷的PBS洗一遍, 3000g 离心5min

    收集细胞,弃尽上清,细胞沉淀加入适量的预冷的裂解液,按100万个细胞中加入 

    100μL裂解液计算。用移液器吹打数下,冰上孵育30分钟, 14000g离心10分钟,

    取上清,即为蛋白提取物。


    组织样品:

    1.新鲜动物组织块迅速置于预冷的生理盐水中,漂洗数次,洗净组织血迹,用滤纸吸干组织

    表面液体,将组织快速剪切成细小的碎片。

    2、按20mg 组织加入200ul裂解液的比例加入预冷裂解液,

    3、用匀浆器匀浆组织,直至充分裂解,(如果裂解不充分可以添加更多裂解液)

    4、冰上孵育30分钟,14000g离心10分钟,取上清液即为蛋白抽提物。