点击这里联系客服创伟生物
创伟生物
SM-005-P
成功添加到购物车

目前选购商品共0件合计:0.00

添加到购物车
正在添加到购物车……
你已经收藏过该商品
成功加入收藏

收藏成功!

您已收藏了1个商品, 查看我的收藏>>

加标签(最多可选3个)

    • 添加
    确定 取消 最多可选不超过三个标签 请至少选择1个标签 设置成功 请输入自定义标签名称! 标签由数字、字母、汉字组成 存在该标签的收藏商品,无法删除 请选择要删除的收藏标签
    • 分享:

    • 收藏此商品
    植物膜蛋白提取试剂盒
    描述:植物膜蛋白占植物细胞总蛋白的很小一部分,但是在植物生理学中起着非常重要的作用。传统的植物膜蛋白分离纯化方法是蔗糖密度梯度离心法和双液相法。这些方法虽然比较有效,但是需要超高速离心和大量的起始原材料,操作过十分繁琐和费时。
    商家编码:
    市 场 价:-
    售      价:5254.00 请登录,确认是否享受优惠
    销量:0 kit 评价:0
    数量:
    5254.00 库存:100kit
    • 立即购买
    • 加入购物车
    客服:
    点击这里联系客服创伟生物 创伟生物

    厂家:
    服务支持:

    组合购

    组合价: ¥
    原价: ¥
    选择组合购商品规格

    描述:植物膜蛋白占植物细胞总蛋白的很小一部分,但是在植物生理学中起着非常重要的作用。传统的植物膜蛋白分离纯化方法是蔗糖密度梯度离心法和双液相法。这些方法虽然比较有效,但是需要超高速离心和大量的起始原材料,操作过十分繁琐和费时。为了克服植物膜蛋白提取中的缺点,我们特别开发了此款植物膜蛋白提取试剂盒。植物组织首先通过缓冲液 A 中致敏,匀浆,然后通过一个特殊的离心管柱,在此过程中匀浆的组织通过柱子特有的 Z 字形通路后细胞膜被切割成大小相等的碎片,后续无需超高速离心,通过差速离心法和密度梯度离心法将天然的质膜蛋白从未破裂的细胞,细胞核,细胞质和细胞器的混合物中分离出来。在每次实验中仅需使用相同量的起始材料,离心力和离心时间,即可高度富集膜蛋白,并保证一致性良好。整个操作过程大约 1 小时可以完成。

    应用:试剂盒用于快速从植物组织中分离天然膜蛋白,可应用于 SDS-PAGE,immunoblottings,ELISA,IP,膜蛋白质结构分析,2-D,酶活性测定及其他应用。
    储存条件:-20℃储存


    应用:

    试剂盒用于快速从植物组织中分离天然膜蛋白,可应用于 SDS-PAGE,immunoblottings,ELISA,IP,膜蛋白质

    结构分析,2-D,酶活性测定及其他应用。

    试剂盒组份(50 次):

    1. 25 ml 裂解液 A

    2. 10 ml 裂解液 B

    3. 50 个离心管柱

    4. 50 个收集管

    5.4 根塑料研磨棒

    6. 组织分离粉

    储存:

    -20℃储存

    所需附加材料

    1XPBS

    涡旋震荡仪

    台式离心机

    说明书中 rpm 根据 Eppendoff 5415C 台式离心机换算

    重要产品信息

    1. 仔细阅读整个操作说明。将缓冲液 A 和缓冲液 B 完全解冻后摇匀,放置于冰上。将离心管柱和接收管套管

    放置于冰上预冷。

    2. 所有离心步骤都需要在 4℃室温下或者低温离心机中进行。

    3. 研究蛋白磷酸化,磷酸酶抑制剂应在使用前加入缓冲液 A 中。蛋白酶抑制剂可以选择添加或不添加。

    4. 推荐使用 BCA 试剂盒用于蛋白浓度测定

    膜蛋白分离步骤

    组织匀浆:由于植物样品的多样性,选择最佳的匀浆方法是得到最佳结果

    的关键。

    1. 将离心管柱及接收管套管放置冰上预冷

    2. A. 大 部 分 较 软 的 植 物 组 织 样 品 , 将 新 鲜 组 织 或 冷 冻 组 织 ( 200-300mg ) 切成小片

    (1-2mmX1-2mm),放入离心管柱套管上,用 1ml 吸头反复挤压组织减少体积,称取 50-80mg

    组织分离粉加入离心管柱中,用塑料棒反复扭转研磨组织 1-2 分钟。加入 100ul Buffer A 至离

    心管柱中,然后继续研磨几分钟,加 A 至满为止,开盖冰上孵育 5 分钟。接转步骤 3。

    B.含水量较多的组织样品(例如水果组织),将大约 300mg 组织样品剪切成小块放入离心管柱

    中,台式离心机最高速离心 1 分钟去除多余水分,然后按照上一条描述方法匀浆,匀浆后冰上

    孵育 5 分钟,接转步骤 3。

    C.较难研磨的组织样品(例如根和水稻叶片),匀浆步骤可在离心管柱外用研钵或同类匀浆

    设备进行操作。匀浆后,加入适量的 Buffer A(大约 300-400ul),冰上孵育 5 分钟,将匀浆好

    的样品转移到离心管柱中,然后接转步骤 3。

    3. 盖上盖子,14000rpm(16,000Xg)离心 30 秒。(需要最短时间达到设定转速)

    4. 弃去离心管柱,涡旋大力震荡 10-20 秒重悬沉淀。

    以下步骤将植物组织匀浆分为四个组分:细胞核、细胞质、细胞器和质膜。

    5. 3000rpm(700Xg)离心 1 分钟(沉淀包括完整的细胞核和大的碎片)。

    6. 将上清转移到新的 1.5ml 离心管中,4℃,16000Xg 离心 30 分钟(延长离心时间可以增加产

    量)。弃去上清(上清为胞浆组份),保存沉淀(沉淀为总膜蛋白组份包括细胞器和质膜)。如果不

    需要分离质膜做到此步骤即可,将总膜组份存储于-80℃。如果需要分离质膜,请不要冷冻总膜组

    份,继续第 7 步骤。

    7. 加入 200ul Buffer B 用吸头反复吹打或涡旋震荡重悬第 6 步的总膜蛋白组份。4℃,10000rpm

    (7800Xg)离心 5 分钟(注意:如果最终质膜组份中含有细胞器膜污染,此步骤离心时间可增加

    到 20 分钟提高纯度)。沉淀部分为细胞器.

    8.第 7 步离心后,小心的将上清液转移到新的 2.0ml 离心管中,加入 1.6ml 预冷的 PBS,盖上盖子

    混匀几次。14000rpm(16000Xg)离心 30 分钟(延长离心时间可以增加产量)。弃去上清液,保

    存沉淀(沉淀为质膜蛋白)。产量一般为 10-100ug。质膜蛋白可以根据下游实验需求用 20-200ul

    含表面活剂的缓冲液溶解,例如含有 Triton X-100,NP-40 或者 SDS 的 PBS 溶液。

    关于分离出的质膜蛋白评价

    许多研究人员利用 WB 对分离的膜蛋白进行纯度检测。一些常用的“胞浆内参”不仅仅存在于胞浆。例如 actin(1), 

    GAPDH (2) 和 tubulin (3)主要存在于胞浆但是他们也存在于质膜中。所以在某些细胞和组织膜蛋白中可以检测

    到这些内参的弱信号不足为奇。更多相关信息,请参阅以下出版物:

    (1). Gruenstein E., et al. (1975). Actin associated with membranes from 3T3 mouse fibroblast and Hela cells. Journal of 

    cell Biology. 64:223-234. 

    (2). Terrasse R., et al. (2012). Human and pneumococcal cell surface glyceraldehydes -3-phosphate dehydrogenase 

    (GAPDH) proteins are both ligands of human C1q protein. J. Biol. Chem. 287:42620-42633.

    (3). Wolff J. (2009). Plasma membrane tubulin. Biochemica et BiophysicaActa

    常见问题

    问题                                       解决方案

    1、低蛋白产量                    

    增加起始细胞/组织的数量

    增加第二步孵育时间到 10 分钟


    2、低蛋白活性 

    保证裂解物低温/添加蛋白酶抑制剂


    3、离心 30 秒后离心管柱中还存留细胞裂解物 

    减少起始细胞/组织的数量或增加离心时间到 2 分钟


    4、质膜蛋白中有胞浆蛋白污染 

    用 0.5ml 预冷的 PBS(含 0.3MNacl,PH9.5)清洗质膜沉淀