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FSQ-301
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    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover,(gDNA去除型)
    商家编码:
    市 场 价:2800.00
    售      价:1000.00 请登录,确认是否享受优惠
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    • 应用: qPCR专用RT试剂盒



    最适用于Realtime PCR用cDNA合成的预混型逆转录试剂。

    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)是利用本公司高性能逆转录酶『ReverTra Ace』开发的Realtime PCR用的逆转录试剂盒,是包含逆转录反应用的所有组分的5×浓度的完全预混型试剂,只需添加模板RNA和水即可迅速地开始反应。另外,由于采用了最适用于Realtime PCR用短链目的片段cDNA合成的反应组成,可在短时间内高效率地制备适用于Realtime PCR的cDNA模板。
     

    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No. FSQ-301)中添附了具有强力DNA分解活性的gDNA Remover,通过在逆转录反应前处理模板RNA,可简便地制备不含基因组DNA的cDNA。最适用于检测目的基因中存在假基因,或无法在横跨内含子的位置上设计引物,模板RNA中有基因组DNA残留问题等Realtime PCR实验。

    【相关产品】Realtime PCR试剂的详细内容请点击这里
     特征

    特征1. 完全预混型试剂
    本试剂是在−20℃条件下也不会冻结的完全预混型试剂。只需添加模板RNA和水,即可简便地合成重复性良好的cDNA。
     
    特征2. 逆转录反应(−)对照溶液容易配制
    由于添附有同样预混型的no-RT Control,逆转录反应(−)对照溶液也很容易配制。

    特征3. 实现了更广的可定量扩增区域(dynamic rang)
    由于采用了Oligo dT和Random Primer按最佳比例混合的primer mix,RNA的整个区域可进行均一、高效率的逆转录反应。因此,可对更广的可定量扩增区域进行分析。

    特征4. 与Realtime PCR试剂的高适应性
    采用了对Realtime PCR的反应体系影响最小的组分,即便向PCR反应液中带入最多20%液量的逆转录反应液,也能显示出很好的线性。最适用于低表达量mRNA的高灵敏度检测。

    特征5. 可简便、迅速地去除基因组DNA
    按顺序添加去除基因组DNA的试剂和逆转录反应试剂,只需20分钟即可配制不含基因组DNA的cDNA。

     

     实验例
     实验例1 与其他公司预混型cDNA合成试剂逆转录反应效率(cDNA合成量)的比较

    以HeLa total RNA100ng为模板,按各公司试剂盒的推荐条件进行逆转录反应,再用Realtime PCR对5种目的基因进行定量。
    结果可见,用本试剂盒可得到最高合成量。

    ●cDNA合成
    试剂:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)及其他公司同类型(预混型)产品
    模板:HeLa total RNA 100ng /10μl反应体系
    反应条件:各公司试剂盒推荐的条件

    ●Realtime PCR
    试剂:THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
    模板:上述cDNA 2μl/20μl反应体系(带入量10%)
    目的片段:代表性基因5种
    测定用仪器:Applied Biosystems 7900HT

     实验例2 模板RNA量对合成效率的影响(标准曲线直线性的确认)

    为评价模板RNA量对逆转录合成效率的影响,以HeLa total RNA 2pg〜2μg(8个梯度)为模板进行逆转录反应,再用Realtime PCR对5种目的基因进行定量。结果可见,5种目的基因的标准曲线没有交叉,显示了很好的直线性。由此可见,用本试剂盒可对各种浓度范围的RNA进行同等效率的逆转录。

    ●cDNA合成
    试剂:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No.FSQ-201)
    模板:HeLa total RNA 2pg-2μg /20μl反应体系

    ●Realtime PCR
    试剂:THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
    模板:上述cDNA2μl/20μl反应体系(带入量10%)
    目的片段:代表性House Keeping Gene 5种
    测定用仪器:Applied Biosystems 7900HT



     实验例3 gDNA Remover去除基因组DNA效果的确认


    为了确认gDNA Remover去除基因组DNA的效果,按以下条件进行了逆转录反应,再以β-Actin为目的片段进行Realtime 
    PCR。
    结果可见,gDNA Remover处理(+)、逆转录(−)〈下面③〉的条件下无法确认到扩增,说明基因组DNA已被去除。

    ●cDNA合成
    试剂:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No.FSQ-301)
    模板:自制的HeLa total RNA 0.5μg /10μl反应体系
    条件:用gDNA Remover添加(+)、或不添加(−)的4×DN Master Mix去除gDNA后,再分别用5×RT Master MixⅡ或5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control进行逆转录反应

    ●Realtime PCR
    试剂:THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
    模板:上述cDNA 2μl/20μl反应体系(带入量10%)
    目的片段:ACTB(188bp)
    测定用仪器:Applied Biosystems 7900HT

     实验例4 与其他公司同类型产品去除基因组DNA效果的比较


    向HeLa total RNA中添加过量的人基因组DNA,通过该实验,与其他公司同类型产品比较去除基因组DNA的效果。
    结果可见,ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover去除基因组DNA的效果最好。

    ●cDNA合成
    试剂:ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No.FSQ-301)及其他公司同类型试剂盒2种
    模板:HeLa total RNA(0, 1pg, 10pg, 100pg, 1ng, 10ng,100ng, 1μg)+人gDNA 100ng/20μl反应体系
    条件:各公司试剂盒的推荐条件
    ●Realtime PCR
    试剂:THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix(Code No.QPS-201)
    模板:上述cDNA 2μl/20μl反应体系(带入量10%)
    目的片段:ACTB(188bp)
    测定用仪器:Applied Biosystems 7900HT

     简要备注

    Q1. 推荐反应时间为15分钟,如果延长时间能否提高cDNA的合成量?
    A1. tRNA等量很多的RNA全部进行逆转录反应时,延长反应时间可提高收量,但一般情况下推荐37℃15分钟可得到足够的cDNA。

    Q2. 哪些RNA可作为模板RNA使用?  
     
    A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。

    Q.3 是否需要RNase H处理?  
     A3. 由于模板RNA的残留会对PCR产生抑制作用,一般情况下,逆转录反应结束后需通过RNase H对模板RNA进行分解。但本试剂盒采用了本公司新开发的系统,模板RNA在逆转录反应后会被非酶性去除,因此逆转录反应后无需进行RNase H处理。

     参考文献

    1)K.Miyazaki et al.,J.Bacteriology.,185:2219−2226(2003)
    2)A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66(2002)
    3)S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246(2002)
    4)S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460(2001)
    5)Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675(2000)
    6)S.Lee et al.,Gene,245:253−266(2000)

     价格表

    (点击品名即可下载产品说明书)

    品名及内容包装保存
    温度
    Code No.价格

    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix
    ・5×RT Master Mix
    ・5×RT Master Mix no-RT Control
    ・Nuclease-free Water

    200次份*

    -20℃FSQ-201

    RMB 2,000

    ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover
    ・gDNA Remover
       ・4×DN Master Mix
       ・5×RT Master Mix II 
    ・5×RT Master Mix II no-RT Control
    ・Nuclease-free Water

    200次份*

    -20℃FSQ-301

    RMB 2,800

    *10μl反应体系的次数。

    ※ReverTra Ace qPCR RT Master Mix(Code No. FSQ-201)的5×RT Master Mix及5×RT Master Mix no-RT Control与ReverTra Ace qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Code No. FSQ-301)的5×RT Master Mix Ⅱ 及5×RT Master Mix Ⅱ no-RT Control 组成各不相同,请勿混用。

     相关产品价格表

    (点击品名即可下载使用说明书)

     

     品名及内容 包装保存
    温度
     Code No. 价格

    ReverTra Ace qPCR RT Kit
     ・5×RT Buffer
     ・Enzyme Mix
     ・Primer Mix
      (oligo dT+Random primer)
     ・Nuclease-free Water

    200次份*-20℃FSQ-101


    ¥1,500 


    *10μl反应体系时的使用次数

    <高效率Realtime PCR用试剂>

     品名 包装 保存
    温度
     Code No. 价格
    THUNDERBIRD Probe qPCR Mix1ml x 1支
      [40次份*]
    1.67ml x 3支
      [200次份*]
    (1.67ml x 3支)×5
      [1000次份*]

    (1.67ml x 3支)×10
      [2000次份*]
     -20℃

    QPS-101T

    QPS-101

    QPS-101B

    QPS-101C


    ¥325

    ¥1,500 


    ¥6,900 

     ¥12,700 

    THUNDERBIRD SYBR® qPCR Mix1ml x 1支
      [40次份*]
    1.67ml x 3支
      [200次份*]
    (1.67ml x 3支)×5
      [1000次份*]
    (1.67ml x 3支)×10
      [2000次份*]
      -20℃

    QPS-201T

    QPS-201

    QPS-201B

    QPS-201C

    ¥325

    ¥1,500 

    ¥6,900 
     
     ¥12,700


    *包装栏中所记载的反应次数是指50μl反应体系时的可使用次数。
    ※50×ROX Reference Dye与Master Mix分开包装。
    ※大包装(B包装和C包装)分别为5个和10个包装的QPS-101/QPS-201。
    ※TaqMan®是Roche Molecular Systems Inc.的注册商标。
    ※SYBR®是Molecular Probes Inc.的注册商标
     

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